图1:筛选来自ZFP362融合和抑制子结构域组合的HIV-1强抑制子。a通向ZD3A蛋白的ZD3A结构物设计示意图。含有ZFP362结构域的NLS可特异性结合HIV-1 LTR启动子，DNMT3A可招募表观遗传沉默复合体。ZFP362-DNMT3A (ZD3A)的结合可导致以甲基化CpG DNA和抑制性组蛋白甲基化为代表的LTR的长期表观遗传转录抑制(右)。b在治疗后3天，通过RT-qPCR检测转染ZFP和ZD3A构建物对慢性感染Jurkat (CHI-Ju)细胞Gag mRNA的影响。c转染ZD3A 3天后，从TNFα激活的CHI-Ju细胞中检测Gag mRNA。d采用RT-qPCR检测Gag mRNA在慢性感染的Jurkat (CHI-Ju)细胞中转染构建物ZFP和ZD3A的效果。e这里展示了一个示意图，描述了开发和评估的12种不同结构，包括ZFP362与一个或多个阻阻剂结构域，如KRAB(K)， PWWP, ADD，甲基转移酶(Mtase)， DNMT3A融合的催化结构域(CD)，全长DNMT3A (ZD3A)和对照ZFP-362。f CHI-Ju细胞用(e)中描述的融合结构转染，转染10天后的Gag mRNA RT-qPCR显示FC4和FC10是LTR活性最有效的阻遏因子。FC4在ZFP362、PWWP、ADD和Mtase结构域之后被称为ZPAMt, FC10在ZFP362、KRAB和Mtase结构域之后被称为KMt。 g Western blot for Myc tag confirmed the expression of ZPAMt, ZKMt, ZD3A, and ZFP. Representative blot of n = 3 biological replicates (h) LTR driven GFP mRNA expression level measured after overexpression of ZPAMt and ZKMt in microglial cell line HC69.5 Data are represented as mean ± standard deviation (SD) in b–d, f, and h. p-values by one-way ANOVA followed by Tukey’s multiple comparisons post hoc test. For b–d, f, and h the error bars indicate the standard deviation of triplicate treated samples and experiments were repeated twice. ****p ≤ 0.0001. Source data are provided as a source data file. Credit: DOI: 10.1038/s41467-021-25839-2
